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益创教你如何操作实验室无菌环境以及如何监控

文章出处:www.sdyechuang.cn 人气:发表时间:2019-12-27 19:47

【导读】微生物检测人员需要每天在无菌室内工作,并在超净工作台或生物安全工作台柜中操作。为了保证检测的准确性,我们必须要求无菌室和台面满足要求。那我们应该如何验证呢?让我们介绍一下如何检查环境中的无菌或灭菌效果。当使用

微生物检测人员天天都需要在无菌室工作,在超净台或者生物安全柜里操作,为了保证我们检测的准确性,我们必须要求无菌室以及工作台符合要求,那我们应该怎样进行验证呢?下面我们介绍一下环境中无菌或杀菌效果应如何检查。

一、紫外灯杀菌效果检查

UV灯时,辐射强度将逐渐达到降低,这将影响其杀菌效果。因此,应该定期检查。紫外线灯杀菌有效波长为253.7纳米,其强度可用中心波长为254纳米的紫外线强度计测定测量。生物替代可以不用紫外线强度计。

生物试验的简单步骤如下:选用枯草芽孢杆菌ATCC 9372制备浓度为106 CFU/毫升至108 CFU/毫升的细菌悬液;脱脂后的0.5厘米×1.0厘米布或铝片在高压灭菌后用作载体。将一滴制备好的细菌悬液滴在每个载体上,干燥备用;将8个细菌感染载体置于无菌容器中,置于紫外灯下方1m-1.5m处,打开紫外灯照射,分别在0.5h、1h、1.5h和2h取出2个细菌感染载体,分别加入含有5mL缓冲蛋白胨水的洗脱液;连续稀释后进行平板计数。用相同的方法将八种细菌载体用作阳性对照,除了它们不暴露于紫外线和紫外线辐射之外,操作与试验组相同。

杀灭率=(阳性对照中回收菌数-试验组中回收菌数)/阳性对照中回收菌数×100%

杀灭率大于99.9%时,认为紫外灯杀菌效果合格。

二、无菌室空气质量检查

无菌室空气质量检查应根据取样计划进行,应使用适当的仪器收集空气中的微生物,并根据空、静、正常作业危险区域的情况使用测定监测危险区域的空气微生物污染。空气中微生物的采样和计数方法多种多样,具体的采样方法和采样器根据多种采样需求的目的而定。由于采样器采集效率不同,应谨慎选择合适的方法和设备。采样器分为两种类型:被动采样器,如细菌滴盘;主动采样器,如过滤采样器、冲击采样器、冲击采样器等。被动空气微生物采样器如

1.沉降法

细菌滴盘不能测量空气中微生物的总数,但可以测量空气中微生物在表面上的沉降速率。空气中微生物的数量可以粗略计算,只要确定每单位时间细菌滴盘上的微生物数量,然后根据细菌滴盘的暴露面积和暴露时间之间的关系。

如果面积小于30m2,设置一条对角线取3点,中心取1点,两端离墙1m处取1点。对于面积大于30m2的室内房间,应在离墙1米和中央的四面各放置一块板,高度为实验台。将培养基平板暴露10分钟,然后盖上平板并倒置放置。培养48小时,并计算每个平板上的菌落数。

在日常监控期间,可以设置可接受的菌落计数限制。一般来说,无菌室内所有取样盘上的细菌总数应少于15个。在空气质量好的无菌室里,每个盘子里通常不会有超过两种细菌生长。

2.空气过滤法:

除自然沉降外,特殊的活性采样器可用于空气采样。主动采样器可以评估危险区域空气微生物的特性。主动采样器主要包括过滤采样器、冲击采样器、冲击采样器等。

冲击采样器可分为狭缝采样器、离心采样器和针孔采样器。狭缝式取样器由额外的真空泵抽吸,收集的空气通过取样器的狭缝式板喷射并撞击在缓慢旋转的板状培养基的表面上,并培养附着的活微生物颗粒以形成菌落并计数。由于内部风扇的高速旋转,气流从采样器的前部被吸入,并从后部流出。在离心机的作用下,空气中的活微生物颗粒有足够的时间撞击

在没有空气采样器的情况下,您可以自行组装空气差错率采样装置,如下图所示,并注意组装连接必须气密。

打开图中大瓶子的水龙头,空气将被泵入无菌水中。4L的水流出后,4L的空气通过小瓶中的无菌水,即4L空气中的微生物保留在50mL无菌水中。无菌吸取1毫升过滤后的水样进行平板计数,并制作2个平行平板。37℃培养48h。

每升空气中细菌的数量是:2个平板上细菌的平均数量×50/4。对

三、无菌室物体表面微生物污染检查

表面微生物污染的检查需要使用接触器或拭子来获得特定时间点特定表面上的微生物数量。

接触器应与容器内已知面积的固体培养基接触表面,接触面积应大于20cm2,整个培养基应均匀用力压在表面几秒钟而不移动。然后将装置放回容器中,清洁取样表面并去除残留的营养物质。接触器培养后出现的菌落可以给出原始表面微生物生存条件的镜像“图”。

使用棉签更简单、更灵活。用拭子擦拭一个表面,就可以计算出它擦拭的微生物数量。对于不能被接触装置接触、不平或有凹陷的非吸收性大表面,拭子取样特别方便。棉签的操作方法如下:

准备材料:自制无菌棉签或购买市售无菌棉签、10厘米×10厘米内径无菌标准板、无菌生理盐水、培养基板。

如果样品物体是平的,将无菌量规板放在物体表面,将浸泡过的无菌棉签均匀涂抹在无菌量规板的中空部分,涂抹时旋转棉签,切断棉签与手的接触部位,将棉签放入一定体积的无菌生理盐水中检查。

敲击采样管80次以上,使棉签上的细菌充分扩散,适当稀释,进行平板计数,37℃培养48h计数。

细菌总数(CFU/cm2)=(平板上菌落的平均数量×稀释因子)/取样面积(cm2)

四、人员接触面无菌检查

人员与检测物体之间的接触面主要受以下因素影响。

被检查人员洗手消毒后,五指并拢。将浸泡过的棉签从柔顺的手指根部到双手的手指末端蘸两次,边搓边旋转棉签。切断操作者手的接触部位,将棉签放入具有一定体积的无菌室内生理盐水中进行检查。

按照“无菌室内物体表面细菌污染检查”的方法进行样品处理、接种、培养、计数和结果报告。